LPAAT-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406544

Übersicht

AGPAT1 kodiert die Lysophosphatidsäure-Acyltransferase Alpha (LPAAT-α), eine mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziierte Acyltransferase, die Lysophosphatidsäure in Phosphatidsäure umwandelt – ein zentrales Zwischenprodukt der Biosynthese von Glycerophospholipiden und Triacylglycerolen. Durch die Regulation der Phosphatidsäure-Pools beeinflusst LPAAT-α die Membranbiogenese, die Bildung von Lipidtröpfchen sowie nachgeschaltete Lipidsignale, die sich auf die Organellendynamik und zelluläre Stressantworten auswirken. Eine Störung der AGPAT1-Aktivität kann die Phospholipidzusammensetzung und den metabolischen Fluss verändern und verknüpft dieses Enzym damit mit Signalwegen, die für Lipidhomöostase und Energiebilanz relevant sind. Eine fehlregulierte Glycerolipid-Metabolisierung unter Beteiligung von AGPAT1 wurde im Zusammenhang mit metabolischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen untersucht, wodurch es ein nützliches Ziel für mechanistische Studien lipidgetriebener zellulärer Prozesse darstellt.

Das LPAAT-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AGPAT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AGPAT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AGPAT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LPAAT-α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AGPAT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LPAAT-α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AGPAT1-Exone abzielen, die für die LPAAT-α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AGPAT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LPAAT-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LPAAT-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AGPAT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LPAAT-α HDR-Plasmid (h) und LPAAT-α HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AGPAT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AGPAT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.