LOK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405859

Übersicht

Die Serin/Threonin-Proteinkinase 10 (STK10), auch als lymphozytenorientierte Kinase (LOK) bekannt, ist eine Kinase der STE20-Familie, die die Organisation des Zytoskeletts und die Zellpolarität durch Phosphorylierungsereignisse reguliert, welche die Aktindynamik und die Funktion von ERM-Proteinen (Ezrin–Radixin–Moesin) beeinflussen. In Immunzellen trägt LOK zur Adhäsion und Migration von Lymphozyten sowie zur Architektur der immunologischen Synapse bei, indem sie Rezeptorsignale mit dem Remodeling des kortikalen Aktins verknüpft. Die STK10-Aktivität ist mit Rho-Familie-GTPase-abhängigen Signalwegen und umfassenderen Signalnetzwerken gekoppelt, die Motilität und Gewebetrafficking koordinieren. Fehlregulierte Zytoskelett-Signalgebung und eine aberrante, kinasevermittelte Kontrolle der Zellbewegung wurden mit Immundysfunktion und krebsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was STK10 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien macht.

Das LOK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STK10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STK10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STK10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LOK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STK10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LOK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STK10-Exone abzielen, die für die LOK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STK10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LOK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LOK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STK10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LOK HDR-Plasmid (h) und LOK HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STK10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STK10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.