Plasmide CRISPR/Cas9 KO LOC147645 (h): sc-406583

Présentation

VSIG10L (LOC147645) code une protéine prédite contenant un domaine V-set et des domaines de type immunoglobuline, dont on s’attend à ce qu’elle se localise à la surface cellulaire et participe aux interactions cellule–cellule ou cellule–matrice. D’après son architecture de domaines et son homologie avec d’autres membres de la superfamille des immunoglobulines, VSIG10L est impliquée dans des programmes d’adhésion épithéliale et la régulation de l’architecture tissulaire, des processus qui recoupent la différenciation, la fonction barrière et des réseaux de signalisation liés à la migration. Les variations d’expression de protéines apparentées à domaines Ig sont fréquemment associées à des interactions modifiées avec le microenvironnement tumoral et à des traits métastatiques, faisant de VSIG10L une cible candidate pour des études mécanistiques en biologie du cancer et du remodelage épithélial. L’étude fonctionnelle de LOC147645 peut donc éclairer les voies qui gouvernent la signalisation dépendante de l’adhésion et la plasticité phénotypique cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LOC147645 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VSIG10L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VSIG10L, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VSIG10L à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LOC147645.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VSIG10L pour l'étude de la signalisation de LOC147645, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VSIG10L essentiels à la fonction de LOC147645
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VSIG10L pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LOC147645 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LOC147645 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VSIG10L. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LOC147645 plasmide HDR (h) et le LOC147645 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VSIG10L pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VSIG10L définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.