Particules Lentivirales d'Activation (h) LMX1B: sc-402945-LAC

LMX1B code un facteur de transcription à homéoboîte de type LIM qui oriente la spécification du destin cellulaire et les programmes de différenciation au cours du développement, avec des rôles particulièrement marqués dans la mise en place du patron dorsal des membres, la maturation des podocytes glomérulaires et l’identité des neurones dopaminergiques du mésencéphale. En se liant à des éléments régulateurs de l’ADN et en coordonnant des réseaux transcriptionnels dépendants de cofacteurs, LMX1B influence des voies qui gouvernent l’organisation du cytosquelette, la dynamique de la matrice extracellulaire et l’expression génique restreinte à certaines lignées. Une activité altérée de LMX1B est associée à des phénotypes congénitaux touchant les membres et le rein, et est fréquemment étudiée dans des contextes de dysfonction des podocytes, de régulation des gènes du développement et de spécification neuronale. En tant que régulateur transcriptionnel nucléaire, LMX1B constitue un nœud accessible pour disséquer les circuits de régulation génique et le contrôle, via les enhancers, de programmes spécifiques des tissus.

Les particules d'activation lentivirales LMX1B (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de LMX1B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LMX1B (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription LMX1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LMX1B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif LMX1B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.