Plasmide Double Nickase (h) LMX1A: sc-418369-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LMX1A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LMX1A Double Nickase (h) et le plasmide LMX1A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LMX1A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LMX1A | sc-418369-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LMX1A | sc-418369-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LMX1A code un facteur de transcription à homéoboîte de type LIM qui agit comme régulateur déterminant de lignée au cours du développement embryonnaire, avec des rôles majeurs dans la spécification des neurones dopaminergiques du mésencéphale et la différenciation des cellules pancréatiques. En se liant à l’ADN via son homéodomaine et en coordonnant les interactions avec des cofacteurs via ses domaines LIM, LMX1A façonne des programmes transcriptionnels liés à la neurogenèse, à l’engagement du destin cellulaire et à la mise en place des tissus. Il s’insère dans des réseaux de signalisation du développement tels que les voies Wnt et BMP, qui coordonnent les gradients de morphogènes et l’expression génique en aval. Des altérations de l’expression de LMX1A ou de son contrôle régulateur ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et ont été explorées dans le contexte de la vulnérabilité des neurones dopaminergiques, pertinente pour la biologie de la maladie de Parkinson.
LMX1A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LMX1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LMX1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LMX1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LMX1A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.