LMO2 Double Nickase Plasmid (m): sc-421447-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LMO2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LMO2 Double-Nickase-Plasmid (m) und LMO2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Lmo2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LMO2: sc-65736
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LMO2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421447-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LMO2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421447-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lmo2 kodiert das LIM-only-Protein LMO2, einen nukleären Adapter, der Multiprotein-Transkriptionskomplexe zusammenbaut und damit Zellschicksalsentscheidungen steuert. In der Maus-Hämatopoese ist LMO2 Teil regulatorischer Netzwerke mit Faktoren wie TAL1/SCL, GATA-Proteinen und LDB1, um Genexpressionsprogramme zu koordinieren, die die Erhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen, die erythroide Differenzierung und die Gefäßentwicklung unterstützen. LMO2-assoziierte transkriptionelle Schaltkreise greifen in übergeordnete Chromatin- und Lineage-Spezifizierungsprozesse ein, die Proliferations- und Differenzierungsdynamiken beeinflussen. Eine fehlregulierte Lmo2-Expression oder eine veränderte Zusammensetzung der Komplexe wird häufig als Modell genutzt, um Mechanismen leukämogener transkriptioneller Umprogrammierung und verwandter hämatologischer Krankheitsbiologie in vivo und in Zellkulturen zu untersuchen.
LMO2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Lmo2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Lmo2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Lmo2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Lmo2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.