LLH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422311

Übersicht

Plod1 kodiert Lysylhydroxylase 1 (LLH1), ein Enzym des endoplasmatischen Retikulums, das spezifische Lysinreste in Prokollagenen hydroxylisiert, wodurch eine nachfolgende Glykosylierung ermöglicht und die Stabilität der Kollagenquervernetzung erhöht wird. Über die Regulation der Kollagenreifung und der Organisation der extrazellulären Matrix beeinflusst LLH1 die Integrität des Bindegewebes, die Struktur der Basalmembran und Gewebeumbauprozesse. Eine Störung der Plod1-Aktivität ist mit einer abnormalen Kollagenfibrillogenese und veränderten Matrixmechaniken verknüpft – Prozesse, die für die Fibrosebiologie, Fragilitätsphänotypen von Gefäßen und Haut sowie für Studien zur Tumormikroumgebung in Mausmodellen relevant sind. Daher wird Plod1 häufig in Zusammenhängen wie ECM-getriebener Signalübertragung, Zell–Matrix-Interaktionen und Mechanotransduktion untersucht.

Das LLH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Plod1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Plod1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Plod1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LLH1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Plod1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LLH1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Plod1-Exone abzielen, die für die LLH1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Plod1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LLH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LLH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Plod1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LLH1 HDR-Plasmid (m) und LLH1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Plod1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Plod1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.