LKB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400313

Übersicht

STK11 kodiert die Serin/Threonin-Kinase LKB1, einen zentralen Regulator der zellulären Energiehomöostase und Polarität, der AMPK und verwandte Kinasen der AMPK-Familie durch Phosphorylierung aktiviert. Durch die Integration von Nährstoff- und Stresssignalen beeinflusst LKB1 die mTOR-Signalübertragung, Autophagie, den mitochondrialen Stoffwechsel und die Kontrolle des Zellzyklus und trägt über Polaritätskomplexe zur Organisation von Epithelien bei. Störungen der LKB1-abhängigen Signalwege stehen mit einer veränderten metabolischen Anpassung, beeinträchtigter Polarität und veränderten genomischen Stressantworten in Zusammenhang. STK11 wird häufig in der Krebsbiologie und im Kontext hereditärer Tumorprädisposition untersucht, da der Verlust der LKB1-Funktion die Wachstumsregulation und metabolische Signalwege neu ausrichtet.

Das LKB1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STK11-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STK11-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STK11 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LKB1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STK11-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LKB1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STK11-Exone abzielen, die für die LKB1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STK11-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LKB1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LKB1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STK11-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LKB1 HDR-Plasmid (h) und LKB1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STK11-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STK11-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.