Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
LKB1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400313
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LKB1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico LKB1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LKB1 Antibody (Ley 37D/G6): sc-32245
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LKB1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400313 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
STK11 codifica la chinasi serina/treonina LKB1, un regolatore chiave dell’omeostasi energetica e della polarità cellulare attraverso la fosforilazione di AMPK e di chinasi correlate della famiglia AMPK. Integrando segnali legati a nutrienti e stress, LKB1 influenza la segnalazione di mTOR, l’autofagia, il metabolismo mitocondriale e il controllo del ciclo cellulare, e contribuisce all’organizzazione dell’epitelio tramite complessi di polarità. L’alterazione della segnalazione dipendente da LKB1 è associata a un’adattabilità metabolica modificata, a una polarità compromessa e a risposte allo stress genomico. STK11 è spesso oggetto di studio in biologia dei tumori e nei contesti di predisposizione ereditaria ai tumori, dove la perdita della funzione di LKB1 rimodella il controllo della crescita e le vie metaboliche.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LKB1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STK11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STK11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STK11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LKB1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STK11 per lo studio della segnalazione di LKB1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni STK11 critici per la funzione di LKB1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STK11 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal LKB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LKB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STK11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal LKB1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LKB1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STK11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STK11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.