Plasmide Double Nickase (h) LIMK-2: sc-401296-NIC

Le gène humain **LIMK2** code la kinase à domaine LIM 2 (LIMK-2), une kinase sérine/thréonine qui phosphoryle et inactive la cofiline afin de réguler le renouvellement des filaments d’actine. Via la signalisation des GTPases de la famille Rho, par l’intermédiaire de ROCK et de PAK, LIMK-2 coordonne la dynamique du cytosquelette à la base du contrôle de la forme cellulaire, de l’adhésion, de la migration et de la cytocinèse. L’activité de LIMK2 contribue à des voies associées à la transition épithélio-mésenchymateuse, à la mécanotransduction et à la structure synaptique, et la dérégulation du remodelage de l’actine est liée à des comportements invasifs et à des phénotypes anormaux de remodelage tissulaire. Des altérations de la signalisation de LIMK2 ont été étudiées dans divers contextes, notamment la motilité des cellules cancéreuses et des programmes liés aux métastases, des processus neurodégénératifs impliquant la dynamique des épines dendritiques, ainsi que le remodelage fibrotique où la contractilité actine–myosine est perturbée.

LIMK-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LIMK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LIMK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LIMK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LIMK2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.