Plásmido CRISPR de Activación (m) LIFR: sc-421433-ACT

Lifr codifica el receptor del factor inhibidor de la leucemia (LIFR), un receptor de citocinas que forma un complejo de señalización con gp130 para transducir ligandos de la familia LIF. La unión del ligando activa las vías JAK/STAT, MAPK/ERK y PI3K/AKT, coordinando programas transcripcionales que regulan decisiones del destino celular, la supervivencia y la diferenciación en múltiples tejidos. En sistemas murinos, la señalización de LIFR se utiliza ampliamente para estudiar la biología de células madre y progenitoras, procesos del neurodesarrollo y la homeostasis tisular. La actividad desregulada de la vía de LIFR se ha vinculado con fenotipos relevantes para anomalías del desarrollo, señalización inflamatoria y programas oncogénicos, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico en redes de señalización relevantes para la enfermedad.

LIFR El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Lifr sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LIFR El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Lifr en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Lifr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LIFR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Lifr y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LIFR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LIFR en células tumorales con expresión de Lifr silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.