Plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX3 (h): sc-404482

Présentation

LHX3 (LIM homeobox 3) code un facteur de transcription à homéodomaine de type LIM, qui coordonne les programmes de spécification des lignages et de différenciation terminale au cours de l’embryogenèse. Dans l’hypophyse et le système nerveux, LHX3 régule des réseaux transcriptionnels contrôlant le destin des cellules productrices d’hormones et le développement des motoneurones, via une liaison à l’ADN spécifique de séquence et le recrutement de cofacteurs. Une perturbation de la régulation génique dépendante de LHX3 dérègle les voies développementales qui gouvernent l’organogenèse de l’hypophyse antérieure et la connectivité neuronale. Des données génétiques humaines associent une altération de la fonction de LHX3 à un déficit combiné en hormones hypophysaires, avec des phénotypes neurodéveloppementaux variables, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LHX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LHX3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LHX3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LHX3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LHX3 pour l'étude de la signalisation de LHX3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LHX3 essentiels à la fonction de LHX3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LHX3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LHX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LHX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LHX3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LHX3 plasmide HDR (h) et le LHX3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LHX3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LHX3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.