Plasmide CRISPR d'Activation (h) LDLR: sc-400645-ACT

Le gène humain **LDLR** code le récepteur des lipoprotéines de basse densité (LDLR), un récepteur endocytique de surface cellulaire qui se lie aux lipoprotéines contenant l’ApoB et l’ApoE afin de médiatiser leur internalisation dépendante de la clathrine et le traitement lysosomal de particules riches en cholestérol. L’activité de LDLR est un déterminant central de l’homéostasie du cholestérol cellulaire et s’inscrit dans les programmes de biosynthèse et de captation des lipides régulés par les SREBP, en s’intégrant aux mécanismes de détection des stérols, au trafic membranaire et aux voies endosome–lysosome. Les perturbations de l’expression ou de la fonction de LDLR sont fortement associées à la dyslipidémie et à des mécanismes pertinents pour l’athérosclérose, ce qui en fait un outil largement utilisé pour étudier le métabolisme des lipoprotéines, le recyclage des récepteurs et les réponses de signalisation induites par les lipides. LDLR est également utilisé comme gène rapporteur pour l’étude du contrôle transcriptionnel des voies du cholestérol et pour modéliser les relations génotype–phénotype liées à la gestion des lipides.

LDLR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LDLR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LDLR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LDLR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LDLR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LDLR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LDLR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LDLR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LDLR dans les cellules tumorales présentant une expression de LDLR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.