Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (m) LAT: sc-421389-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) LAT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LAT Double Nickase (m) et le plasmide LAT Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Lat. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LAT Antibody (11B.12): sc-53550
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) LAT | sc-421389-NIC | 20 µg | $410.00 |
La LAT murine (linker for activation of T cells, « adaptateur de liaison pour l’activation des lymphocytes T ») code une protéine adaptatrice transmembranaire rapidement phosphorylée après l’engagement du récepteur des cellules T (TCR), créant des sites d’ancrage pour des protéines de signalisation à domaine SH2. LAT organise le « signalosome » LAT, reliant des kinases proximales telles que LCK et ZAP70 à l’activation de PLCγ1, au flux calcique, à la signalisation Ras–MAPK et aux voies dépendantes de PI3K qui contrôlent l’activation et la différenciation des lymphocytes T ainsi que la production de cytokines. La perturbation de la signalisation de LAT modifie la formation de la synapse immunologique et la sélection des lymphocytes T, et un dysfonctionnement de la voie LAT est associé, dans des modèles expérimentaux, à une dysrégulation immunitaire et à des phénotypes lymphoprolifératifs. En tant que nœud central de la signalisation immunitaire adaptative, LAT est largement étudiée dans les mécanismes de tolérance des lymphocytes T, d’inflammation et de biologie des maladies à médiation immunitaire.
LAT Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Lat dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Lat. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Lat. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Lat.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.