Laminin α-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401176-ACT

LAMA1 kodiert Laminin α‑1, eine wesentliche Untereinheit von Laminin‑111 und verwandten Laminin‑Heterotrimeren der Basalmembran, die die extrazelluläre Matrix organisieren und die Gewebearchitektur regulieren. Über Interaktionen mit Integrinen, Dystroglykan und anderen Matrixrezeptoren unterstützt Laminin α‑1 Zelladhäsion, Polarität, Migration und Überleben und beeinflusst Signalwege wie Fokaladhäsion/FAK, PI3K–AKT und MAPK. LAMA1 ist besonders wichtig für die Morphogenese während der Entwicklung sowie für die Integrität epithelialer und endothelialer Basalmembranen und prägt damit den Zell‑Matrix‑Dialog und die Mechanotransduktion. Fehlregulierte Laminin-Netzwerke und veränderte LAMA1-Expression werden mit angeborenen Basalmembran-Erkrankungen, neuroentwicklungsbedingten Phänotypen und pathologischem Remodeling in Krebs- und Fibrosekontexten in Verbindung gebracht.

Laminin α-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LAMA1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Laminin α-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LAMA1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LAMA1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Laminin α-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LAMA1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Laminin α-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Laminin α-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LAMA1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.