Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Lamin B2 Double Nickase Plasmid (m): sc-421446-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Lamin B2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Lamin B2 Double-Nickase-Plasmid (m) und Lamin B2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Lmnb2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Lamin B2: sc-377379
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Lamin B2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421446-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Lamin B2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421446-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Lmnb2** kodiert Lamin B2, ein zentrales Intermediärfilament der nukleären Lamina, das der Kernhülle strukturellen Halt verleiht und zur Organisation des peripheren Chromatins beiträgt. Lamin B2 ist an der Kernarchitektur, der zeitlichen Steuerung der DNA-Replikation und dem mitotischen Wiederaufbau der Kernhülle beteiligt und verknüpft so Lamina-Dynamiken mit Zellzyklusprogression und Genomstabilität. Über Interaktionen mit lamina-assoziierten Domänen trägt es zur Transkriptionsregulation und zur höhergeordneten Chromatinorganisation bei. Eine Fehlregulation von Lamin B2 und verwandten Lamina-Komponenten ist relevant für Laminopathien sowie für allgemeinere Mechanismen nukleärer Fragilität, veränderter Genexpressionsprogramme und Stressantworten, die in entwicklungsbiologischen und degenerativen Kontexten untersucht werden.
Lamin B2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Lmnb2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Lmnb2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Lmnb2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Lmnb2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.