Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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L-type Ca++ CP γ8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407391
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- L-type Ca++ CP γ8 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im L-type Ca++ CP γ8-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: L-type Ca++ CP γ8: sc-514421
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
L-type Ca++ CP γ8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-407391 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CACNG8 kodiert die akzessorische Untereinheit γ8 des L‑Typ‑Ca++‑Kanals, einen transmembranen Regulator, der das Trafficking, die Gating-Eigenschaften und die Membranstabilität spannungsabhängiger Calciumkanal-Komplexe in erregbaren Zellen moduliert. Durch die Feinabstimmung des Ca2+-Einstroms beeinflusst γ8 calciumabhängige Signalnetzwerke, die Membrandepolarisation mit nachgeschalteten Signalwegen koppeln, welche die neuronale Erregbarkeit, die synaptische Transmission und die aktivitätsabhängige Genexpression steuern. Eine veränderte CACNG8-Funktion wurde mit neurophysiologischen Phänotypen in Verbindung gebracht und könnte zu Mechanismen beitragen, die für die Anfallsanfälligkeit und andere Erkrankungen relevant sind, die mit einer fehlregulierten Calciumsignalgebung zusammenhängen. Als Bestandteil makromolekularer Ionenkanal-Assemblies bietet CACNG8 einen Ansatzpunkt, um die Zusammensetzung von Kanalkomplexen und die zellulären Folgen von Störungen akzessorischer Untereinheiten zu untersuchen.
Das L-type Ca++ CP γ8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CACNG8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CACNG8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CACNG8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die L-type Ca++ CP γ8-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CACNG8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der L-type Ca++ CP γ8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CACNG8-Exone abzielen, die für die L-type Ca++ CP γ8-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CACNG8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom L-type Ca++ CP γ8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom L-type Ca++ CP γ8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CACNG8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das L-type Ca++ CP γ8 HDR-Plasmid (h) und L-type Ca++ CP γ8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CACNG8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CACNG8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.