L-type Ca++ CP γ3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406760
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- L-type Ca++ CP γ3 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im L-type Ca++ CP γ3-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: L-type Ca++ CP γ3: sc-81889
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
L-type Ca++ CP γ3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-406760 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CACNG3 kodiert die menschliche L‑Typ‑Ca2+-Kanal‑Hilfsuntereinheit γ3, ein transmembranäres Regulationsprotein, das den Transport (Trafficking) und die biophysikalischen Eigenschaften von L‑Typ‑spannungsabhängigen Calciumkanälen moduliert. Durch die Feinabstimmung des Calciumeinstroms beeinflusst γ3 die Membran-Erregbarkeit, die Reiz‑Sekretions‑Kopplung sowie calciumabhängige Transkriptionsprogramme, die neuronale und muskuläre Signalübertragung prägen. Die durch CACNG3 vermittelte Kanalregulation greift in Ca2+-abhängige Signalwege wie Calmodulin/CaMK und Calcineurin‑NFAT ein und wirkt sich dadurch auf synaptische Plastizität und aktivitätsabhängige Genexpression aus. Veränderungen der CACNG3-Expression oder der Zusammensetzung des Kanalkomplexes wurden in Studien zu neuropsychiatrischen Phänotypen und erregbarkeitsbezogenen Erkrankungen untersucht, bei denen eine gestörte Calciumhomöostase ein häufiges mechanistisches Grundmotiv darstellt.
Das L-type Ca++ CP γ3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CACNG3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CACNG3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CACNG3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die L-type Ca++ CP γ3-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CACNG3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der L-type Ca++ CP γ3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CACNG3-Exone abzielen, die für die L-type Ca++ CP γ3-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CACNG3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom L-type Ca++ CP γ3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom L-type Ca++ CP γ3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CACNG3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das L-type Ca++ CP γ3 HDR-Plasmid (h) und L-type Ca++ CP γ3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CACNG3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CACNG3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.