KY peptidase Double Nickase Plasmid (m): sc-421366-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KY peptidase Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KY peptidase Double-Nickase-Plasmid (m) und KY peptidase Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ky abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KY peptidase Double Nickase Plasmid (m) | sc-421366-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KY peptidase Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421366-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ky kodiert die KY-Peptidase, ein muskelangereichertes Protein, das mit der Aufrechterhaltung der Integrität der Skelettmuskulatur und der sarkomerischen Organisation in Verbindung gebracht wird und Funktionen in der Proteostase sowie im strukturellen Remodeling unter Stress von Muskelfasern übernimmt. Bei der Maus ist die Aktivität der KY-Peptidase mit Signalwegen verknüpft, die die Erhaltung und den Umsatz von Myofibrillen steuern und so eine normale Kontraktionsfunktion und Widerstandsfähigkeit gegenüber Schädigungen unterstützen. Störungen von Ky wurden mit neuromuskulären Phänotypen assoziiert, die einer muskeldystrophieähnlichen Pathologie entsprechen, was das Gen für die Untersuchung von Mechanismen der Myopathie nützlich macht. Die KY-Peptidase ist daher relevant für die Forschung zu Muskeldegeneration und -regeneration sowie zu Netzwerken der Proteinkontrolle in quergestreiftem Gewebe.
KY peptidase Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ky-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ky abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ky-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ky-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.