Plasmide Double Nickase (h) KV1.5: sc-404341-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) KV1.5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide KV1.5 Double Nickase (h) et le plasmide KV1.5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KCNA5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: KV1.5 Antibody (A-3): sc-377110
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) KV1.5 | sc-404341-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) KV1.5 | sc-404341-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNA5 code la sous-unité humaine du canal potassique voltage‑dépendant KV1.5, une conductance rectifiante retardée qui façonne la repolarisation membranaire et contrôle l’excitabilité cellulaire. Dans le cœur et les tissus excitables, KV1.5 contribue à la durée du potentiel d’action et s’intègre aux réseaux d’homéostasie ionique qui régulent la gestion du calcium et la signalisation électrique. Le canal influence également les programmes de prolifération et de migration dans les cellules non excitables via un contrôle, dépendant du potentiel de membrane, de la signalisation et des points de contrôle du cycle cellulaire. Une expression altérée de KCNA5 ou un dysfonctionnement du canal a été associé à des phénotypes d’électrophysiologie atriale et à des mécanismes plus larges liés aux canalopathies, ce qui étaye son utilisation dans des études sur le remodelage électrique et la transduction du signal.
KV1.5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNA5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.