Plasmide Double Nickase (h) KV1.3: sc-403814-NIC

KCNA3 code pour le canal potassique humain Kv1.3, un canal voltage‑dépendant de la membrane plasmique dont la conductance contribue à établir le potentiel de membrane au repos et à réguler la repolarisation du potentiel d’action dans les cellules excitables comme non excitables. L’activité de Kv1.3 module la signalisation du Ca2+ en contrôlant la polarisation membranaire, influençant ainsi des voies associées à des programmes transcriptionnels induits par l’activation, à la prolifération et à l’apoptose dans les cellules immunitaires et d’autres types cellulaires. Ce canal participe à la signalisation électrique et à l’homéostasie ionique, des processus qui affectent le métabolisme cellulaire et les réponses au stress. Le dysfonctionnement de KCNA3/Kv1.3 a été étudié dans le contexte de l’inflammation d’origine immunitaire et d’une excitabilité altérée, ce qui étaye sa pertinence pour les mécanismes sous‑jacents à des phénotypes neurologiques et immunologiques.

KV1.3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.