Krs-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-416738-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Krs-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Krs-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Krs-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf STK3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Krs-1: sc-130405
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Krs-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416738-NIC | 20 µg | $410.00 |
STK3 kodiert die Serin/Threonin-Kinase Krs-1 (auch als MST2 bekannt), eine zentrale Komponente der Hippo-Signalkaskade, die Zellproliferation begrenzt und Apoptose fördert, indem sie LATS1/2 sowie die transkriptionellen Koaktivatoren YAP/TAZ reguliert. Krs-1 integriert Signale aus Zell-Zell-Kontakten, der Zytoskelettdynamik und Stresssignalwegen, um Transkriptionsprogramme zu modulieren, die das Wachstum und die Gewebehomöostase steuern. Über Cross-Talk mit MAPK-, PI3K–AKT- und Apoptose-Signalwegen beeinflusst STK3 die Progression des Zellzyklus, die Differenzierung sowie die Reaktionen auf oxidativen und genotoxischen Stress. Eine Fehlregulation von Hippo-Pathway-Kinasen einschließlich STK3 wurde mit einer veränderten Kontrolle der Organsgröße und tumorassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was STK3 für Studien zu onkogener Signalübertragung, Epithelbiologie und „Pathway Rewiring“ relevant macht.
Krs-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des STK3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von STK3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die STK3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit STK3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.