Klotho Lentiviral Activation Particles (m): sc-421290-LAC

Das murine Kl-Gen kodiert Klotho, ein Typ‑I‑Single‑Pass‑Transmembranprotein, dessen extrazelluläre Domäne abgespalten werden kann und dann als zirkulierender Faktor wirkt, der Wachstumsfaktor‑ und Hormonsignalwege moduliert. Klotho fungiert als obligater Korezeptor für endokrines FGF‑Signaling (insbesondere FGF23) zur Regulation des Phosphat‑ und Vitamin‑D‑Stoffwechsels und beeinflusst außerdem in mehreren Geweben Reaktionen auf oxidativen Stress sowie Ionenkanäle und Transportprozesse. Eine veränderte Kl/Klotho‑Expression ist in Mausmodellen mit gestörter Mineralhomöostase, renalen und kardiovaskulären Phänotypen sowie altersassoziiertem Funktionsverlust verbunden und ist damit ein häufig genutzter Knotenpunkt zur Untersuchung von Signalwegen. Auf zellulärer Ebene beeinflusst Klotho Transkriptions‑ und Signalprogramme, die mit metabolischer Regulation, inflammatorischem Grundtonus und Stressresilienz verknüpft sind, und unterstützt so mechanistische Studien zur degenerationsassoziierten Biologie.

Klotho Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Kl-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Klotho Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Kl-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Klotho-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Kl-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.