Partículas Lentivirales de Activación (m) Klotho: sc-421290-LAC

El gen Kl de ratón codifica Klotho, una proteína transmembrana de tipo I de paso único cuyo dominio extracelular puede desprenderse y actuar como un factor circulante que modula la señalización de factores de crecimiento y hormonas. Klotho funciona como correceptor obligatorio para la señalización endocrina de FGF (en particular FGF23) para regular el metabolismo del fosfato y de la vitamina D, y también influye en las respuestas al estrés oxidativo y en procesos de canales iónicos/transporte en múltiples tejidos. La alteración de la expresión de Kl/Klotho se asocia con una homeostasis mineral desregulada, fenotipos renales y cardiovasculares, y el deterioro funcional asociado a la edad en modelos de ratón, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para la interrogación de vías. A nivel celular, Klotho afecta programas transcripcionales y de señalización vinculados a la regulación metabólica, el tono inflamatorio y la resiliencia al estrés, lo que respalda estudios mecanísticos de biología asociada a la degeneración.

Las partículas de activación lentiviral Klotho (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Kl en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Klotho (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Kl, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Klotho. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Kl y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.