KLHL9 Double Nickase Plasmid (h): sc-406655-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KLHL9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KLHL9 Double-Nickase-Plasmid (h) und KLHL9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KLHL9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KLHL9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406655-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KLHL9 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406655-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KLHL9 kodiert ein Protein der BTB–BACK–Kelch-Familie, das als Substratadapter in Cullin-3-(CUL3)-RING-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexen fungiert und zur Spezifität des ubiquitinabhängigen Proteinabbaus beiträgt. Durch regulierte Ubiquitinierung unterstützt KLHL9 die zelluläre Proteostase und beeinflusst Prozesse, die mit der Organisation des Zytoskeletts und dem Fortschreiten des Zellzyklus, einschließlich der Kontrolle der Mitose, verknüpft sind. Störungen von KLHL9 wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und neuromuskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, was die Bedeutung eines ausgewogenen Ubiquitin-Signalings in langlebigen, erregbaren Geweben unterstreicht. Als humanes KLHL-Protein wird es häufig in Signalwegen untersucht, die die Substraterkennung durch E3-Ligasen mit Stressantworten und zellulärer Homöostase verknüpfen.
KLHL9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KLHL9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KLHL9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KLHL9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KLHL9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.