KIR6.1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401477-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KIR6.1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KIR6.1 Double-Nickase-Plasmid (h) und KIR6.1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNJ8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KIR6.1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401477-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KIR6.1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401477-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNJ8 kodiert die inward-rectifying Kaliumkanal-Untereinheit KIR6.1, eine zentrale Komponente ATP-sensitiver Kaliumkanäle (KATP), die den zellulären Stoffwechselzustand mit der Erregbarkeit der Membran koppeln. Durch die Assoziation mit Sulfonylharnstoffrezeptor-Untereinheiten trägt KIR6.1 zur Regulation des Tonus der vaskulären glatten Muskulatur und weiterer Prozesse in erregbaren Zellen bei – über eine ATP/ADP-abhängige Kanalsteuerung und die nachgeschaltete Kontrolle des Calciumeinstroms und der Kontraktilität. Dieser metabolische Sensorweg beeinflusst die Reaktionen auf Hypoxie, ischämischen Stress und Energiemangel, indem er Membranpotenzial und Erregbarkeit moduliert. Genetische Variation oder Fehlregulation von KCNJ8 wurde mit kardiovaskulären und erregbarkeitsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien zur Ionenkanalbiologie und zur bioenergetischen Signalübertragung unterstreicht.
KIR6.1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNJ8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNJ8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNJ8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNJ8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.