KIR4.1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402244-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KIR4.1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KIR4.1 Double-Nickase-Plasmid (h) und KIR4.1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNJ10 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: KIR4.1: sc-293252
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KIR4.1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402244-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KIR4.1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402244-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNJ10 kodiert die inward-rectifying Kaliumkanal‑Untereinheit KIR4.1, einen wesentlichen Determinanten des Membranpotenzials von Glia- und Epithelzellen, der Kalium-Pufferung, räumliche K+-Umverteilung und osmotische Homöostase unterstützt. Im zentralen Nervensystem trägt die KIR4.1‑Aktivität in Astrozyten zur Entfernung von extrazellulärem K+ bei, gekoppelt an Glutamataufnahme und Wasserfluss, und beeinflusst damit neuronale Erregbarkeit und Netzwerkstabilität. Der Kanal ist außerdem an Ionentransportprozessen in den Epithelien von Niere und Innenohr beteiligt und verknüpft die K+-Handhabung mit dem Flüssigkeits- und elektrochemischen Gleichgewicht des Gewebes. Eine Fehlregulation oder genetische Variation in KCNJ10 wurde mit Phänotypen erhöhter neurologischer Erregbarkeit sowie syndromalen Kanalopathien mit Beteiligung von Gehirn, Niere und Hörfunktion in Verbindung gebracht und ist damit ein relevantes Ziel für mechanistische Studien zu Signalwegen der Ionhomöostase.
KIR4.1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNJ10-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNJ10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNJ10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNJ10-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.