Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR2.1 (h): sc-401974

Présentation

KCNJ2 code pour le canal potassique humain à rectification entrante Kir2.1, un déterminant majeur du potentiel de membrane de repos et de l’excitabilité du muscle cardiaque et du muscle squelettique. Kir2.1 conduit les courants IK1 qui stabilisent la repolarisation terminale et façonnent la morphologie des potentiels d’action, en s’intégrant aux processus de trafic membranaire et de contrôle de l’ouverture dépendant du PIP2. Une altération de la fonction de KCNJ2 est associée à des phénotypes de canalopathie tels que le syndrome d’Andersen–Tawil et peut influencer la susceptibilité aux arythmies, la paralysie périodique et la signalisation du développement dans les tissus excitables. Dans des modèles cellulaires, l’activité de Kir2.1 interagit avec l’homéostasie électrophysiologique, la gestion du calcium et la régulation de l’expression génique dépendante du potentiel de membrane.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR2.1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNJ2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNJ2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNJ2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIR2.1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNJ2 pour l'étude de la signalisation de KIR2.1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNJ2 essentiels à la fonction de KIR2.1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNJ2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIR2.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIR2.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNJ2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIR2.1 plasmide HDR (h) et le KIR2.1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNJ2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNJ2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.