KIF3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421275

Übersicht

Kif3a kodiert das Kinesin-Familienmitglied KIF3A, eine zentrale Motoruntereinheit des heterotrimeren Kinesin-2-Komplexes, der den anterograden intraflagellären Transport entlang von Mikrotubuli antreibt. KIF3A ist für Aufbau und Erhalt der primären Zilie unerlässlich und ermöglicht zilienabhängige Signaltransduktion, einschließlich der Aktivität des Hedgehog-Signalwegs, sowie umfassendere ziliäre Transportprozesse, die Zellschicksalsentscheidungen beeinflussen. In Mausmodellen ist die Funktion von Kif3a eng mit der Gewebemorphogenese und homöostatischen Signalprogrammen verknüpft, die auf intakte Zilien angewiesen sind, sodass Störungen mit ciliopathie-relevanten Phänotypen in Verbindung stehen. Daher wird KIF3A häufig genutzt, um zu untersuchen, wie mikrotubuli-basierter Transport mit Entwicklungssignalen und der zilienvermittelten Regulation von Proliferation und Differenzierung zusammenwirkt.

Das KIF3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Kif3a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Kif3a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Kif3a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KIF3A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Kif3a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KIF3A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Kif3a-Exone abzielen, die für die KIF3A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Kif3a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KIF3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom KIF3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Kif3a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KIF3A HDR-Plasmid (m) und KIF3A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Kif3a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Kif3a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.