KIF13A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403751-ACT

KIF13A kodiert ein Mikrotubuli-Motorprotein der Kinesin-3-Familie, das den plusendgerichteten Transport von Vesikeln und Proteinkomplexen unterstützt und dadurch zu polarisiertem Transport sowie zur Organisation des Zytoskeletts beiträgt. Die Aktivität von KIF13A ist mit endosomalen und membranassoziierten Transportprozessen verknüpft, die die Zellpolarität, die Signaldynamik und die räumliche Steuerung der Frachtzustellung beeinflussen. Über seine Rolle im intrazellulären Transport kann KIF13A Signalwege beeinflussen, die die Verteilung von Membranrezeptoren und die Integrität von Zellkontakten regulieren. Eine veränderte Regulation dieser Prozesse wurde mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Entzündungen, die Funktion epithelialer Barrieren und andere Kontexte relevant sind, in denen transportabhängige Signalübertragung entscheidend ist.

KIF13A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KIF13A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KIF13A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KIF13A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KIF13A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KIF13A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KIF13A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KIF13A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KIF13A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KIF13A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.