Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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KHS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405817
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- KHS El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico KHS, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: KHS Anticuerpo (E-5): sc-374070
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
KHS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405817 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La quinasa quinasa quinasa quinasa 5 de la proteína quinasa activada por mitógenos (MAP4K5), también conocida como quinasa homóloga a SPS1/STE20 (KHS), es una quinasa de serina/treonina de la familia Ste20 que actúa aguas arriba de los módulos de señalización MAPK. MAP4K5 contribuye a la señalización de respuesta al estrés e inflamatoria mediante la regulación de JNK y vías relacionadas, influyendo en programas transcripcionales que controlan la proliferación, la apoptosis y la dinámica del citoesqueleto. En células humanas, la actividad de KHS se ha vinculado con la modulación de respuestas inmunitarias innatas y de la señalización metabólica, situando a MAP4K5 dentro de redes más amplias que integran señales mediadas por receptores con cascadas de quinasas. La señalización desregulada de MAP4K5 se ha investigado en contextos como la reconfiguración de vías oncogénicas y los mecanismos de enfermedades inflamatorias, lo que respalda su utilidad como nodo para el análisis de vías.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO KHS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MAP4K5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MAP4K5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MAP4K5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KHS.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MAP4K5 para la investigación de la señalización de KHS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MAP4K5 críticos para la función de KHS
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MAP4K5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido KHS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KHS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MAP4K5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KHS (h) y el plásmido HDR KHS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MAP4K5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MAP4K5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.