Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ketohexokinase (m): sc-421261

Présentation

Khk code la cétohexokinase (fructokinase), une enzyme clé qui catalyse la phosphorylation du fructose en fructose‑1‑phosphate, engageant ainsi le fructose dans les flux carbonés en aval. Dans les tissus murins dotés d’une forte capacité de prise en charge du fructose, cette activité s’articule avec la glycolyse, la néoglucogenèse et, plus largement, le métabolisme des glucides et de l’énergie via la régulation des intermédiaires triose‑phosphate et la signalisation métabolique hépatique. Des altérations du métabolisme du fructose dépendant de KHK ont été associées à des phénotypes de stress métabolique, notamment une accumulation lipidique dérégulée et des perturbations de la signalisation de l’insuline, faisant de Khk un nœud utile pour étudier la détection des nutriments et le remodelage métabolique. Dans le cadre des voies répondant au fructose, la perturbation de la cétohexokinase peut affecter l’équilibre redox, l’utilisation de l’ATP et les programmes transcriptionnels qui régissent l’homéostasie des lipides et du glucose.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ketohexokinase (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Khk dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Khk, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Khk à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ketohexokinase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Khk pour l'étude de la signalisation de Ketohexokinase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Khk essentiels à la fonction de Ketohexokinase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Khk pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ketohexokinase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ketohexokinase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Khk. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ketohexokinase plasmide HDR (m) et le Ketohexokinase (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Khk pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Khk définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.