Plasmide Double Nickase (h) Keratin 81: sc-405797-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Keratin 81 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Keratin 81 Double Nickase (h) et le plasmide Keratin 81 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KRT81. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Keratin 81 Antibody (36-Z): sc-100929
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Keratin 81 | sc-405797-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Keratin 81 | sc-405797-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT81 code la kératine 81, une kératine capillaire de type II qui s’assemble avec des kératines de type I pour former des filaments intermédiaires assurant la résistance à la traction et l’organisation structurale de l’épithélium différencié du follicule pileux. La kératine 81 contribue à l’intégrité du cytosquelette, à la mécanique cellulaire et à l’architecture des structures kératinisées grâce à un assemblage régulé des filaments, au réticulage (crosslinking) et à une expression dépendante de la différenciation. Sa fonction s’intègre aux programmes de différenciation épithéliale et aux voies de signalisation de réponse au stress qui influencent la dynamique des filaments et la résilience des tissus. Des altérations de la séquence ou de l’expression de KRT81 sont associées à des phénotypes de fragilité de la tige pilaire et à des troubles apparentés de la formation de la fibre capillaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie des réseaux de kératines.
Keratin 81 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT81 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT81. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT81. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT81.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.