Keap1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400190-LAC

Das humane KEAP1-Gen kodiert Keap1, einen Substrat-Adapter für den CUL3–RBX1-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplex, der den proteasomalen Abbau von NRF2 (NFE2L2) steuert und dadurch antioxidative sowie xenobiotische Stressantworten feinjustiert. Durch die Detektion von Elektrophilen und reaktiven Sauerstoffspezies über cysteinreiche Domänen reguliert Keap1 die nukleäre Anreicherung von NRF2 und die Transkription zytoprotektiver Gene, die an Glutathionstoffwechsel, NADPH-Regeneration und der Phase-II-Entgiftung beteiligt sind. Diese KEAP1–NRF2-Achse verknüpft Redox-Homöostase mit metabolischer Umprogrammierung, inflammatorischer Signalgebung und Autophagie über Interaktionen mit Proteinen wie p62/SQSTM1. Eine Dysregulation der KEAP1-abhängigen Kontrolle der NRF2-Signalübertragung wird häufig im Kontext der Biologie des oxidativen Stresses untersucht, einschließlich Karzinogenese, chemoresistenzassoziierter Phänotypen und Modellen chronischer Gewebeschädigung.

Keap1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente KEAP1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Keap1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der KEAP1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Keap1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen KEAP1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.