KCNQ3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403544-ACT

KCNQ3 kodiert die spannungsabhängige Kaliumkanal‑Untereinheit Kv7.3, einen zentralen Bestandteil neuronaler M‑Typ‑K⁺‑Ströme, die das Membranpotenzial stabilisieren und repetitive Entladungen begrenzen. Durch die Formung der unterschwelligen Erregbarkeit und der Anpassung der Spike‑Frequenz beeinflusst KCNQ3 die synaptische Integration und Netzwerkoszillationen und steht in Wechselwirkung mit cholinergen sowie phosphoinositidabhängigen Signalwegen, die das Kanal‑Gating modulieren. Eine veränderte KCNQ3‑Expression oder ‑Funktion wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und epileptischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zur kortikalen Erregbarkeit und zur Homöostase neuronaler Schaltkreise unterstreicht. Humanes KCNQ3 wird daher häufig in mechanistischen Untersuchungen zur Regulation von Ionenkanälen, zu neuronalen Signalwegen und zu Genotyp‑Phänotyp‑Beziehungen bei Erregbarkeitsstörungen eingesetzt.

KCNQ3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KCNQ3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KCNQ3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KCNQ3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KCNQ3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KCNQ3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KCNQ3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KCNQ3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KCNQ3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KCNQ3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.