KCNH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405756

Übersicht

KCNH1 kodiert einen spannungsabhängigen Kaliumkanal (Kv10.1/Eag1), der das Membranpotenzial und den Kaliumfluss reguliert und damit die zelluläre Erregbarkeit sowie nachgeschaltete, calciumabhängige Signalwege prägt. Über seine elektrischen Eigenschaften hinaus beeinflusst die KCNH1-Aktivität den Zellzyklus, die Proliferation und die Zytoskelettdynamik über bioelektrische Kontrollmechanismen und eine phosphorylierungsabhängige Modulation des Kanals. Eine Expression von KCNH1 wurde in neuronalen und nicht-neuronalen Kontexten berichtet und verknüpft die Kanalaktivität mit Prozessen wie neuronalen Feuerungsmustern und stimulusabhängiger Signalübertragung. Eine Fehlregulation von KCNH1 ist mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen assoziiert und wurde im Kontext aberranter Wachstumssignale in der Krebsbiologie untersucht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zu ionenkanalgetriebenen Signalwegen unterstützt.

Das KCNH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNH1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNH1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNH1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KCNH1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNH1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KCNH1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNH1-Exone abzielen, die für die KCNH1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNH1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KCNH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KCNH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNH1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KCNH1 HDR-Plasmid (h) und KCNH1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNH1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNH1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.