KCC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402080

Übersicht

SLC12A5 kodiert den neuronspezifischen K+-Cl−-Kotransporter KCC2, einen zentralen Regulator der intrazellulären Chlorid-Homöostase, der hyperpolarisierende GABAerge und glyzinerge Neurotransmission ermöglicht. Indem KCC2 den Cl−-Ausstrom antreibt, prägt er die Stärke inhibitorischer Synapsen, die Membranerregbarkeit und die Reifung neuronaler Schaltkreise und steht in funktioneller Wechselwirkung mit Ionentransport- und synaptischen Signalwegen, die aktivitätsabhängige Plastizität steuern. Eine veränderte KCC2-Expression oder -Funktion wurde mit einer gestörten Erregungs-Hemmungs-Balance im zentralen Nervensystem in Verbindung gebracht, was die Relevanz für Studien zu Epilepsie, neuroentwicklungsbedingten Störungen, neuropathischen Schmerzen und Neurodegeneration unterstreicht. KCC2 wird außerdem als Marker und mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um die Entwicklung inhibitorischer Synapsen, Chlorid-Dynamiken und Netzwerkoszillationen zu untersuchen.

Das KCC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC12A5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC12A5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC12A5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KCC2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC12A5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KCC2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC12A5-Exone abzielen, die für die KCC2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC12A5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KCC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KCC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC12A5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KCC2 HDR-Plasmid (h) und KCC2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC12A5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC12A5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.