KCC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422973

Übersicht

Slc12a4 kodiert den murinen K–Cl-Kotransporter KCC1 (SLC12A4), einen elektroneutralen Transporter, der den Ausstrom von K+ und Cl− koppelt, um intrazelluläres Chlorid, Zellvolumen und die Ionenhomöostase zu regulieren. Die Aktivität von KCC1 trägt zu Signalwegen der volumenregulatorischen Abnahme (RVD), zu osmotischen Stressantworten und zu chloridabhängiger Signalübertragung bei, die das Membranpotenzial und die Zytoskelettdynamik beeinflussen kann. In hämatopoetischen und immunologischen Zelllinien unterstützt KCC1 Ionentransportprogramme, die mit der Hydratation von Erythrozyten und den Aktivierungszuständen von Leukozyten verknüpft sind, und liefert damit einen mechanistischen Rahmen für die Untersuchung transportgetriebener Physiologie. Eine Fehlregulation des K–Cl-Transports wurde mit veränderten Eigenschaften roter Blutkörperchen sowie mit weiter gefassten inflammatorischen oder metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was Slc12a4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für Forschung zu Ionentransport und Homöostase macht.

Das KCC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc12a4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc12a4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc12a4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KCC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc12a4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KCC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc12a4-Exone abzielen, die für die KCC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc12a4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KCC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom KCC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc12a4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KCC1 HDR-Plasmid (m) und KCC1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc12a4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc12a4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.