Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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karyopherin β2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403099-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das karyopherin β2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- karyopherin β2 Double-Nickase-Plasmid (h) und karyopherin β2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TNPO1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: karyopherin β2: sc-166127
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
karyopherin β2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403099-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
karyopherin β2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403099-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNPO1 kodiert Karyopherin β2 (Transportin‑1), einen durch RanGTP regulierten nukleären Importrezeptor, der PY‑Typ‑Kernlokalisationssignale erkennt und den selektiven Transport von RNA‑bindenden Proteinen und anderen Frachtmolekülen durch den Kernporenkomplex vermittelt. Dieser Importweg unterstützt den RNA‑Stoffwechsel, die Dynamik von Stressgranula und die nukleo‑zytoplasmatische Verteilung regulatorischer Faktoren und verknüpft die TNPO1‑Aktivität damit mit der Kontrolle der Genexpression und der Proteostase. Veränderte, transportinabhängige Trafficking‑Prozesse wurden sowohl mit gestörter RNA‑Prozessierung und Proteinaggregations‑Phänotypen in der neurodegenerationsbezogenen Biologie als auch mit proliferativen Signalprogrammen in Krebsmodellen in Verbindung gebracht. Daher wird TNPO1 häufig untersucht, um Mechanismen der Spezifität des Kerntransports, die Kopplung an den Ran‑Zyklus und die Auswirkungen fehlgeleiteter RBPs auf die zelluläre Homöostase zu analysieren.
karyopherin β2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TNPO1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TNPO1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TNPO1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TNPO1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.