Plasmide CRISPR d'Activation (h) karyopherin α1: sc-402324-ACT

KPNA1 code la karyophérine alpha 1, un adaptateur importine-α qui reconnaît les signaux classiques de localisation nucléaire et couple les protéines cargo à l’importine-β pour un transport, régulé par la GTPase Ran, à travers le complexe du pore nucléaire. En contrôlant l’entrée nucléaire de facteurs de transcription, de régulateurs du cycle cellulaire et de protéines de la réponse aux dommages de l’ADN, KPNA1 contribue à façonner les programmes d’expression génique, la régulation de la chromatine et la signalisation d’adaptation au stress. Des altérations du trafic nucléocytoplasmique impliquant les voies des importines ont été associées à une signalisation oncogénique, à des réponses immunitaires et inflammatoires altérées, ainsi qu’à des dépendances du cycle de vie viral, ce qui rend KPNA1 pertinent pour des études mécanistiques de ces processus. L’activité de KPNA1 est également liée à la protéostasie et à des phénotypes de compartimentation nucléaire qui influencent la différenciation et l’identité cellulaire.

karyopherin α1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KPNA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

karyopherin α1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KPNA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KPNA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de karyopherin α1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KPNA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de karyopherin α1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie karyopherin α1 dans les cellules tumorales présentant une expression de KPNA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.