JRAB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410130

Übersicht

MICALL2 kodiert JRAB (auch als MICAL-L2 bekannt), einen Rab13-Effektor, der als Gerüstprotein fungiert und die Vesikeltransport-Maschinerie mit dem Umbau des Aktinzytoskeletts an Zell-Zell-Kontakten verknüpft. JRAB ist an der Regulation der Organisation von Adhärens- und Tight Junctions, am Membranrecycling und am polarisierten Transport beteiligt und beeinflusst damit die Integrität der epithelialen Barriere sowie die gerichtete Migration. Über Interaktionen mit Rab-GTPasen und Komponenten der Zellkontakte trägt MICALL2 zu Signalwegen bei, die die Zytoskelettdynamik und den intrazellulären Transport steuern. Eine veränderte Expression oder Regulation von MICALL2 wurde in Studien zur Tumorzellinvasion und zu metastaseassoziierten Phänotypen beschrieben, was das Gen für die Untersuchung von Mechanismen des Verlusts der Zellpolarität und der Motilität relevant macht.

Das JRAB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MICALL2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MICALL2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MICALL2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die JRAB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MICALL2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der JRAB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MICALL2-Exone abzielen, die für die JRAB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MICALL2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom JRAB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom JRAB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MICALL2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das JRAB HDR-Plasmid (h) und JRAB HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MICALL2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MICALL2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.