Josephin-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-418165-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Josephin-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Josephin-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Josephin-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TAF1D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Josephin-3: sc-514821
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Josephin-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418165-NIC | 20 µg | $410.00 |
TAF1D kodiert einen TFIID-Untereinheiten-assoziierten Faktor, der an der Transkription durch RNA-Polymerase I und an der nukleolären Ribosomenbiogenese beteiligt ist und damit die Prä-rRNA-Synthese mit der Kontrolle von Zellwachstum und Proteostase verknüpft. Durch die Koordination der rDNA-Promotorfunktion und der Prä-rRNA-Prozessierung unterstützt TAF1D die proliferative Kapazität sowie die stressadaptive Umgestaltung des Nukleolus. Störungen von Pol-I-getriebenen Transkriptionsprogrammen sind für die Zellzyklusregulation, metabolische Anpassung und Antworten auf proteotoxischen Stress von breiter Bedeutung und werden häufig bei Krebs und anderen Erkrankungen der Wachstumskontrolle beeinträchtigt. Obwohl „Josephin-3“ als Proteinname eher mit deubiquitinierenden Enzymen in Verbindung gebracht wird, ist dieses Produkt für den humanen TAF1D-Lokus spezifiziert und eignet sich zur Untersuchung nukleolärer und transkriptioneller Phänotypen, die aus einer Störung von TAF1D resultieren.
Josephin-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TAF1D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TAF1D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TAF1D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TAF1D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.