Plásmido Doble Nickase (h) Josephin-3: sc-418165-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Josephin-3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Josephin-3 (h) y el plásmido de doble nickasa Josephin-3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TAF1D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Josephin-3 Anticuerpo (G-12): sc-514821
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Josephin-3 | sc-418165-NIC | 20 µg | $410.00 |
TAF1D codifica un factor asociado a una subunidad de TFIID implicado en la transcripción por la ARN polimerasa I y en la biogénesis ribosomal nucleolar, conectando la síntesis de pre-rRNA con el control del crecimiento celular y la proteostasis. Al coordinar la función del promotor del rDNA y el procesamiento del pre-rRNA, TAF1D sostiene la capacidad proliferativa y la remodelación del nucléolo adaptativa al estrés. La disrupción de programas transcripcionales impulsados por la Pol I es ampliamente relevante para la regulación del ciclo celular, la adaptación metabólica y las respuestas al estrés proteotóxico, que con frecuencia se ven alteradas en el cáncer y otros trastornos del control del crecimiento. Aunque Josephin-3 es un nombre de proteína más comúnmente asociado a enzimas desubiquitinantes, este producto se especifica para el locus humano TAF1D y es adecuado para investigar fenotipos nucleolares y transcripcionales derivados de la alteración de TAF1D.
Josephin-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TAF1D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TAF1D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TAF1D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TAF1D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.