JNK1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424053-ACT

Mapk8 kodiert die c-Jun-N-terminale Kinase 1 (JNK1), eine stressaktivierte MAP-Kinase, die extrazelluläre Signale integriert, um Transkription, Apoptose, Proliferation und Zytokin-Signalübertragung zu regulieren. JNK1 phosphoryliert JUN und weitere AP-1-Komponenten nachgeschaltet von MAP3K/MKK4/7-Kaskaden und prägt dadurch Genprogramme, die an Entzündung und zellulärer Anpassung an oxidativen, genotoxischen und ER-Stress beteiligt sind. In Mausmodellen wird die JNK1-Aktivität häufig genutzt, um Immun-Signalwege, metabolische Homöostase und neuronale Stressantworten zu untersuchen; eine Fehlregulation des Signalwegs wird mit chronisch entzündlichen Phänotypen und Gewebeumbau in Verbindung gebracht. Diese Funktionen machen Mapk8 zu einem zentralen Knotenpunkt, um das Cross-talk der MAPK-Signalwege mit NF-κB-, Insulin- und mitochondrialen Stress-Signalwegen zu analysieren.

JNK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Mapk8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

JNK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Mapk8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Mapk8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen JNK1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Mapk8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von JNK1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des JNK1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Mapk8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.