Jagged1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421197

概要

Jag1は膜結合型リガンドであるJagged1をコードしており、Jagged1はNotch受容体の正統的（カノニカル）な活性化因子として、マウスにおける細胞運命決定、境界形成、組織パターニングを制御する傍分泌ならぬ接触依存（ジャクスタクリン）シグナル伝達を調節する。Jagged1とNotchの結合により、Notch細胞内ドメインがタンパク質分解によって遊離され、RBPJ/CSL複合体を介した転写プログラムの再編が誘導される。これにより、血管新生、幹細胞・前駆細胞の維持、上皮―間葉相互作用などの過程が形作られる。発生および疾患モデルでは、Jag1/Notchシグナルの変化が、分化の制御不全、異常な血管リモデリング、免疫細胞および間質細胞の挙動変化と関連していることが示されている。Notchの出力は状況依存性が非常に高いため、Jag1の機能喪失は、in vivoおよび培養細胞において、リガンド特異的なシグナル閾値や経路間クロストークを解析するための直接的な手段となる。

Jagged1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるJag1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Jag1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Jag1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Jagged1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Jagged1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Jag1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Jagged1の機能に不可欠なJag1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Jag1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Jagged1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびJagged1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Jag1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Jagged1 HDRプラスミド（m）および Jagged1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはJag1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のJag1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。