Partículas Lentivirales de Activación (m) ITPase: sc-421191-LAC
- Especies Diana: mouse
- 200 µl de Partículas Lentivirales de Activación CRISPR/dCas listas para usar
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) ITPase es un sistema de activación de la trascripción por mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen determinado a través de la tranducción lentiviral de las células
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) ITPase incluyen los siguientes elementos activadores SAM: plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada, (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y un plásmido que codifica la secuencia de diana específica de 20 nt de ARN. También contienen genes de resistencia a blasticidina, higromicina y puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación génica
- Los gRNA codificados por el ITPase Plásmido de activación lentiviral (m) y el ITPase Plásmido de activación lentiviral (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas del promotor Itpa. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Partículas Lentivirales de Activación (m) ITPase | sc-421191-LAC | 200 µl | $455.00 |
El gen Itpa de ratón codifica la inosina trifosfato pirofosfatasa (ITPasa), una enzima “depuradora” del pool de nucleótidos que hidroliza trifosfatos de purina no canónicos como ITP y dITP para evitar su incorporación errónea en el ADN y el ARN. Al limitar la incorporación de bases aberrantes y el consiguiente estrés por reparación de desajustes y por replicación, la ITPasa favorece la estabilidad del genoma y una transcripción fiel en tejidos proliferativos. La alteración de esta vía puede aumentar el desequilibrio de nucleótidos, incrementar la señalización de daño en el ADN y sensibilizar a las células al estrés metabólico u oxidativo que genera purinas desaminadas. En investigación biomédica, Itpa se estudia con frecuencia en el contexto del control de calidad de los ácidos nucleicos, la fidelidad de replicación y las respuestas celulares a perturbaciones genotóxicas y metabólicas.
Las partículas de activación lentiviral ITPase (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Itpa en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral ITPase (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Itpa, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ITPase. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Itpa y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.