Plasmide CRISPR/Cas9 KO ITM1 (h): sc-405155

Présentation

La STT3A humaine code la sous-unité catalytique du complexe oligosaccharyltransférase (OST), qui assure la N‑glycosylation liée à l’azote, co‑traductionnelle, dans le réticulum endoplasmique. En transférant des oligosaccharides préassemblés vers des résidus d’asparagine au sein de polypeptides naissants, STT3A favorise le repliement des protéines, le contrôle qualité et le trafic intracellulaire, et influence la dégradation associée au RE (ERAD) ainsi que la protéostasie. Une perturbation de la glycosylation dépendante de STT3A peut compromettre la maturation des protéines membranaires et sécrétées, modifier la signalisation des récepteurs et de l’immunité, et activer la réponse aux protéines mal repliées (unfolded protein response, UPR). Les voies de N‑glycosylation dérégulées ont été associées aux troubles congénitaux de la glycosylation et sont fréquemment remaniées dans le cancer et d’autres maladies caractérisées par un stress du RE et des glycoprotéomes de surface cellulaire altérés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ITM1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STT3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STT3A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STT3A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ITM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STT3A pour l'étude de la signalisation de ITM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STT3A essentiels à la fonction de ITM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STT3A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ITM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ITM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STT3A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ITM1 plasmide HDR (h) et le ITM1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STT3A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STT3A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.