Plasmide CRISPR/Cas9 KO IRX4 (h): sc-405618

Présentation

IRX4 (Iroquois homeobox 4) code un facteur de transcription à homéodomaine qui régule des programmes d’expression génique spatio-temporels au cours du développement, avec des rôles marqués dans le cœur et d’autres lignées mésodermiques. En tant que protéine nucléaire se liant à l’ADN, IRX4 contribue à des réseaux transcriptionnels qui orientent les choix de destinée cellulaire, la différenciation et la mise en place des tissus, en modulant des gènes cibles en aval et en interagissant avec des voies plus larges régulées par les gènes homeobox. Une expression d’IRX4 dérégulée ou des circuits de régulation altérés ont été impliqués dans des perturbations de la signalisation du développement et dans des états transcriptionnels dépendants du contexte observés en cancérologie, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la spécification de lignée et de la régulation génique associée aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IRX4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IRX4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IRX4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IRX4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IRX4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IRX4 pour l'étude de la signalisation de IRX4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IRX4 essentiels à la fonction de IRX4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IRX4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IRX4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IRX4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IRX4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IRX4 plasmide HDR (h) et le IRX4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IRX4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IRX4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.