IRX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421153

Übersicht

Irx1 kodiert den Iroquois-Homeobox-Transkriptionsfaktor IRX1, einen nukleären, DNA-bindenden Regulator, der embryonale Gewebe strukturiert und die Festlegung von Zelllinien steuert. In der Mausentwicklung trägt IRX1 zu Transkriptionsprogrammen bei, die Morphogenese, Zellschicksalsentscheidungen und die räumliche Organisation von Organanlagen regulieren, und ist dabei in umfassendere, durch Homeobox-Gene gesteuerte regulatorische Netzwerke eingebunden. Eine fehlregulierte IRX1-Expression oder eine veränderte regulatorische Kontrolle wurde mit Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht und im Kontext abweichender Differenzierungszustände untersucht, die für die Krebsbiologie relevant sind. Als transkriptioneller Knotenpunkt wird IRX1 häufig im Hinblick auf seine nachgeschalteten Zielgene, Abhängigkeiten vom Chromatinzustand und das Zusammenspiel mit Signalwegen untersucht, die die Gewebeidentität prägen.

Das IRX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Irx1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Irx1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Irx1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IRX1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Irx1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IRX1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Irx1-Exone abzielen, die für die IRX1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Irx1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IRX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IRX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Irx1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IRX1 HDR-Plasmid (m) und IRX1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Irx1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Irx1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.