Plasmide CRISPR/Cas9 KO IRS-3 (m): sc-421151

Présentation

Irs3 code pour le substrat du récepteur de l’insuline 3 (IRS-3), un adaptateur cytoplasmique qui relie les récepteurs de l’insuline et de l’IGF‑1 activés à la signalisation en aval via les voies PI3K–AKT et MAPK. En fournissant des sites d’ancrage phosphotyrosine pour des protéines à domaine SH2, IRS‑3 contribue à la régulation de la captation du glucose, de la synthèse du glycogène, du métabolisme lipidique et de la prolifération dépendante des facteurs de croissance. Dans des modèles murins, une signalisation altérée de la famille IRS est largement pertinente pour la résistance à l’insuline, les dysfonctions métaboliques associées à l’obésité et le dialogue croisé inflammatoire qui influence l’homéostasie énergétique. L’étude d’IRS‑3 aide à disséquer les biais de signalisation spécifiques aux tissus et le comportement compensatoire des réseaux entre paralogues d’IRS en biologie métabolique et endocrinienne.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IRS-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Irs3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Irs3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Irs3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IRS-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Irs3 pour l'étude de la signalisation de IRS-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Irs3 essentiels à la fonction de IRS-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Irs3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IRS-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IRS-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Irs3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IRS-3 plasmide HDR (m) et le IRS-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Irs3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Irs3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.