Plasmide CRISPR/Cas9 KO IRS-2 (h): sc-400474

Présentation

Le substrat du récepteur de l’insuline 2 (IRS‑2) est une protéine adaptatrice cytoplasmique qui relie les récepteurs de l’insuline et de l’IGF‑1 activés à la signalisation en aval via les voies PI3K–AKT et RAS–MAPK. En subissant une phosphorylation sur tyrosine médiée par le récepteur, IRS2 recrute des effecteurs à domaine SH2 afin de réguler le métabolisme du glucose, l’homéostasie lipidique, la croissance cellulaire, la survie et la différenciation. La signalisation dépendante d’IRS2 contribue à l’action hépatique de l’insuline, à la fonction des cellules β pancréatiques et à l’équilibre énergétique, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans l’insulinorésistance, le diabète de type 2, l’obésité et les phénotypes métaboliques associés. Des altérations de la signalisation d’IRS2 ont également été impliquées, selon le contexte, dans des effets sur la prolifération et la motilité, ce qui soutient son utilisation dans la recherche sur les voies de signalisation et les mécanismes des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IRS-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IRS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IRS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IRS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IRS-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IRS2 pour l'étude de la signalisation de IRS-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IRS2 essentiels à la fonction de IRS-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IRS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IRS-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IRS-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IRS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IRS-2 plasmide HDR (h) et le IRS-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IRS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IRS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.