Plasmide CRISPR d'Activation (h) IRF-5: sc-400920-ACT

IRF5 code le facteur régulateur des interférons 5 (IRF-5), un facteur de transcription qui coordonne les programmes génétiques de l’immunité innée et de l’inflammation en aval des récepteurs de reconnaissance des motifs et de la signalisation des cytokines. IRF-5 contribue aux réponses aux interférons de type I, aux réseaux transcriptionnels associés à NF-κB et à la polarisation des macrophages et des cellules dendritiques via la régulation des gènes stimulés par les interférons et des cytokines pro-inflammatoires. Une activité d’IRF5 altérée a été associée à une signalisation immunitaire dérégulée dans l’auto-immunité systémique et des phénotypes inflammatoires chroniques, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée en immunogénétique et en défense de l’hôte. Dans les cellules humaines, la fonction d’IRF-5 est couramment étudiée dans des voies liées à la signalisation des récepteurs de type Toll, aux réponses antivirales et au contrôle transcriptionnel de la production de cytokines.

IRF-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IRF5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IRF-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IRF5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IRF5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IRF-5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IRF5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IRF-5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IRF-5 dans les cellules tumorales présentant une expression de IRF5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.