IQGAP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400597-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IQGAP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IQGAP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und IQGAP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IQGAP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IQGAP1: sc-376021
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IQGAP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400597-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IQGAP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400597-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IQGAP1 kodiert IQGAP1, ein multidomäniges Gerüstprotein, das Signale von Rho-Familien-GTPasen, Calmodulin und Zytoskelett-Regulatoren integriert, um Aktin-Dynamik, Zellpolarität und Membrantransport zu koordinieren. IQGAP1 verknüpft Adhäsionskomplexe und das Aktinzytoskelett mit Signalwegen wie MAPK/ERK und Wnt/β-Catenin und beeinflusst dadurch Migration, Proliferation und Zytokinese. Über Interaktionen mit Proteinen wie CDC42, RAC1, β-Catenin, E-Cadherin und Komponenten des Exozysten trägt IQGAP1 dazu bei, räumlich begrenzte Signalgebung an der führenden Zellkante sowie an Zell-Zell-Kontakten zu organisieren. Eine Fehlregulation der IQGAP1-Expression oder -Lokalisierung wurde in mehreren krebsrelevanten Kontexten mit veränderter epithelialer Integrität, invasivem Verhalten und onkogener Signalgebung in Verbindung gebracht, was IQGAP1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien metastasebezogener Prozesse macht.
IQGAP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IQGAP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IQGAP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IQGAP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IQGAP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.